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酶解法.酶解法通过利用几丁质酶、纤维素酶或溶壁酶等酶液的一种或多种,使灵芝抱子细胞壁中的成分降解,释放其有效成分.使用生物酶辅助提取灵芝酸A,终实现灵芝酸A的提取率达到0.54%. 溶菌法.利用微生物和灵芝抱子一同发酵,让微生物在发酵过程中降解灵芝抱子细胞壁.利用益生菌枯草芽抱杆菌、嗜酸乳杆菌与灵芝抱子进行液态发酵,终使得灵芝抱子破壁率达到85%以上.化学法化学法的优点与生物法较为相似;缺点是提取溶剂易导致有效成分变性,且溶剂残留不易去除.溶剂提取法.溶剂提取法利用“相似相溶”原理,使灵芝抱子在水、乙醇等溶剂中长时间浸泡或回流,从而使有效成分扩散到溶剂中.例如,Lee等8采用25%乙醇提取灵芝中的成分,终减压浓缩并定容至500mL保存,通过灵芝的25%乙醇提取物,研究其通过Nrf2/HO-1通路增强细胞的抗氧化作用,该方法对灵芝孢子的提取率较好.
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灭菌彻底灭菌仓内叠放料袋时要堆叠合理,纵向每4排料袋约宽60cm作为一行,行与行之间要留有空隙,以使蒸汽均匀循环。用旺火烧到罩膜鼓起时,排出冷空气,当罩膜内温度达到100P时,连续保持24~30h,才可以停火降温;注意加温过程中要适时加水,保持水在规定的水位范围内,加水过程中要保证罩膜内温度不下降。灭菌时,防止灭菌罩膜漏气,要注意蒸汽炉的蒸汽发生量与灭菌物数量相匹配,灭菌袋数增加,应相应延长灭菌时间。接种时防止料温太高料温太高,超过38t,易烧死菌种,好是在灭菌后的料袋还有余温(32~35t)时接种。提供适宜的培菌环境在培养室或塑料薄膜大棚内暗光培养,好保持七分阴三分阳,以利菌丝生长。鼠害。发菌阶段,要定期检查、翻堆、通风,严防料温上升到32t以上而出现“烧菌”现象;发菌期间培养室(棚)内温度低于20t,可用火加温,每天中午通风1~2h。菌丝爬满木段后,再在弱光环境中培养20d以上,促使菌丝老化,培菌时间需2~3个
用750g、口径4cm的瓶,也可采用广口瓶或罐头瓶。拌料装瓶主料与辅料等先拌匀,把糖溶于水中而后逐渐加入料中并充分拌匀,每100kg干料加水140?160kg,以手紧握料指缝中有少量水滴下为宜。采用徒手或装瓶机分装,要求松紧适中,直至离瓶口1cm处,压平,中央用捣木打孔至瓶底,洗净瓶口、瓶壁污物,瓶口用牛皮纸包好。灭菌接种常压100兀灭菌,持续8?12h,高压灭菌121兀,保持1.5h。待冷却后,在无菌条件下接入菌种。然后放到培养室,控制温度25兀,室内相对湿度控制在70%以下。培养室内保持黑暗状态,以利菌丝生长。一般经20d发菌培养,当菌丝长至1/2瓶时,可以除去封口纸,搬至于实体发生室。此时控温25兀?28兀,相对湿度增至90%~95%,保持空气清新,增强漫射光。菌盖不断生长,直至四周白色生长圈消失,即停止生长扩大,但仍可继续加厚。子实体形成菌管,弹射出红褐色孢子。
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