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酶解法.酶解法通过利用几丁质酶、纤维素酶或溶壁酶等酶液的一种或多种,使灵芝抱子细胞壁中的成分降解,释放其有效成分.使用生物酶辅助提取灵芝酸A,终实现灵芝酸A的提取率达到0.54%. 溶菌法.利用微生物和灵芝抱子一同发酵,让微生物在发酵过程中降解灵芝抱子细胞壁.利用益生菌枯草芽抱杆菌、嗜酸乳杆菌与灵芝抱子进行液态发酵,终使得灵芝抱子破壁率达到85%以上.化学法化学法的优点与生物法较为相似;缺点是提取溶剂易导致有效成分变性,且溶剂残留不易去除.溶剂提取法.溶剂提取法利用“相似相溶”原理,使灵芝抱子在水、乙醇等溶剂中长时间浸泡或回流,从而使有效成分扩散到溶剂中.例如,Lee等8采用25%乙醇提取灵芝中的成分,终减压浓缩并定容至500mL保存,通过灵芝的25%乙醇提取物,研究其通过Nrf2/HO-1通路增强细胞的抗氧化作用,该方法对灵芝孢子的提取率较好.
用750g、口径4cm的瓶,也可采用广口瓶或罐头瓶。拌料装瓶主料与辅料等先拌匀,把糖溶于水中而后逐渐加入料中并充分拌匀,每100kg干料加水140?160kg,以手紧握料指缝中有少量水滴下为宜。采用徒手或装瓶机分装,要求松紧适中,直至离瓶口1cm处,压平,中央用捣木打孔至瓶底,洗净瓶口、瓶壁污物,瓶口用牛皮纸包好。灭菌接种常压100兀灭菌,持续8?12h,高压灭菌121兀,保持1.5h。待冷却后,在无菌条件下接入菌种。然后放到培养室,控制温度25兀,室内相对湿度控制在70%以下。培养室内保持黑暗状态,以利菌丝生长。一般经20d发菌培养,当菌丝长至1/2瓶时,可以除去封口纸,搬至于实体发生室。此时控温25兀?28兀,相对湿度增至90%~95%,保持空气清新,增强漫射光。菌盖不断生长,直至四周白色生长圈消失,即停止生长扩大,但仍可继续加厚。子实体形成菌管,弹射出红褐色孢子。
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种植流程截椴装袋将原材截成30cm长的短椴木,直径超过20cm者,辟开材树皮朝外,用利刀修光断面、枝叉面,以免剌破袋膜,引起感染杂菌,将木材装入40x65cm规格的0.005厚的低压聚乙烯袋内,每袋装3---6段,用绳子扎紧袋口。蒸汽灭菌将菌袋按排叠放,排间留有20厘米的空隙,采用一层横排一层竖排“井”字形叠放,排放好底层覆盖农膜,外层再盖一层彩条布,四周用沙袋将农膜及彩条布压实,防止漏气。当温度达到100T后,持续10h不间断加热,灭菌结束后,闷3—5h,等灶内温度下降到60T以下,取出菌袋放入接种棚内。菌袋接种汉中多采用开放式接种,一般在1月下旬进行,先将菌种足量放入棚内(按每袋菌棒0.25kg),再用二氯异尿酸钠消毒粉(保菇灵)进行棚内灭菌,30x4mx2.5m大棚用量为20包,灭菌4—5h。接种人员进入时用酒精喷雾灭菌,8人为一组,日接种20t,采用两端断面接种,先脱袋接种袋底菌种,再接种袋口,每袋用种0.2-0.25kg。
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